Uji Bakteri Koliform. Uji koliform merupakan salah satu cara yang di gunakan untuk mengontrol mikroba dalam sanitasi industri makanan. Bakteri Coliform adalah bakteri indikator yang di gunakan untuk menunjukan adanya polusi kotoran dalam makanan dan air yang di uji. Adanya bakteri koliform di dalam makanan atau minuman yang di uji menunjukan kemungkinan adanya mikroorganisme patogen dalam bahan makanan dan air yang di uji. Patogen yang di maksud dapat berupa bakteri, protozoa ataupun parasit multiseluler lainnya baik yang bersifat enteropatogenik ataupun enterotoksigenik yang berbahaya bagi kesehatan.
Uji Bakteri Koliform
Uji bakteri koliform merupakan uji kualitatif yang biasanya di lakukan dalam tiga tahap. Uji koliform ini tidak harus di lakukan secara lengkap tergantung pada berbagai faktor yang mendukung seperti biaya, waktu dan tujuan pengujian. Namun dalam kesempatan kali ini kami akan memberikan prosedur uji bakteri koliform secara lengkap. Prosedurnya adalah sebagai berikut:
Uji koliform dengan sample air
Persiapan alat dan Bahan:
- Alat : tabung + tabung durham, erlenmeyer, pipet, jarum ose, cawan EMB, dan inkubator
- Bahan: lactose Broth (LB), agar-agar dan sampel air
Prosedur Uji Bakteri Koliform
1. Uji Penduga Koliform dengan metode MPN (most portable number)
- Siapkan 7 tabung+tabung durham lalu isi dengan LB
- Pisahkan 5 tabung lalu tambahkan masing-masing dengan 10 ml sample air. Ambil 1 tabung, tambahkan 1,0 ml sample air, dan tabung terakhir di isi dengan 0,1 ml sample air
- Inkubasikan tabung-tabung tersebut dalam inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam, lalu amati. Tabung di nyatakan positif mengandung koliform jika terbentuk gas sebanyak 10% atau lebih dari volume dalam tabung durham.
- Tabung yang tidak menunjukan pembentukan gas di perpanjang inkubasinya hingga 48 jam, jika tetap tidak terbentuk gas, maka di anggap negatif.
- Tabung positif di hitung pada masing-masing seri. MPN penduga dapat di hitung sesuai dengan tabel MPN 7 tabung
2. Uji Penguat Koliform
- Siapkan 7 cawan EMB yang berisi agar-agar
- Ambil sample dari tabung uji penduga MPN yang positif dengan jarum ose lalu inokulasikan pada masing-masing agar cawan EMB dengan metode goresan kuadran
- Inkubasikan cawan EMB dalam inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam
- Hitung jumlah cawan yang menunjukan pertumbuhan koliform lalu hitung MPN penguat dengan tabel MPN 7 tabung
3. Uji Pelengkap Koliform
- Uji pelengkap dilakukan untuk menentukan bakteri Escherichia coli.
- Dari koloni yang berwarna pada uji penguat diinokulasikan ke dalam medium Lactose Broth (LB) dan medium agar miring Nutrient Agar (NA), dengan jarum inokulasi secara aseptik.
- Lalu inkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam.
- Bila hasilnya positif terbentuk asam dan gas pada Lactose Broth, maka sampel positif mengandung bakteri Escherichia coli.
- Dari media agar miring NA dibuat pewarnaan Gram dimana bakteri Escherichia coli merupakan Gram negatif berbentuk batang pendek.
